HPLC

hplc

Yüksek performanslı sıvı kromatografları (HPLC’ler), bir karışımın bileşenlerini ayırmak için bir sıvı mobil faz kullanır. Bileşenler bir çözücü içinde çözülür ve yüksek basınç altında kromatografik bir kolondan akmaya zorlanır. Sütunda, karışım, bileşenlerine ayrılır. Bileşenler bir detektörden akar ve bir kromatogram üretilir. Çoğu HPLC, solventleri paketlenmiş sabit yataklar boyunca zorlamak için yüksek basınçlı pompalar kullanır. İzokratik pompalar, bileşikleri çıkarmak için sabit mobil faz bileşimi kullanır. Buna karşılık, gradyanlı pompalar, farklı bileşikleri çıkarmak için organik çözücünün gücünü değiştirir. Akış kontrollü pompalar, degradeleri otomatik olarak veren HPLC’ler için çok uygundur. Akış hızı, maksimum pompa basıncı ve pompa doğruluğu gibi spesifikasyonlar cihazlar arasında farklılık gösterir. Basit sistemlerde, numune bir enjeksiyon valfi ile sunulur. Daha karmaşık HPLC’ler, mikroişlemcili bir otomatik numune alıcıya sahiptir.



dedektör hplc
HPLC Dedektörü

HPLC Uygulamaları

HPLC’ler birkaç algılama yöntemi kullanır. Ultraviyole (UV) dedektörleri bir numunenin bir veya daha fazla dalga boyunda ışığı emme yeteneğini ölçer. Işık saçılma detektörleri, sütun atığını nebülize eder, çözücüyü buharlaştırır ve sonra bir ışık saçma hücresindeki damlacıkları algılar. Elektrokimyasal dedektörler akımı bir analitin uygun bir elektrottaki oksidasyon / redüksiyon reaksiyonundan ölçer. Radyokimyasal dedektörler, beta partikül iyonlaşmasıyla ilişkili floresanı tespit etmek için trityum veya karbon-14 kullanır. Kütle spektroskopisi dedektörleri bir örneği iyonize eder ve iyon akımını tespit etmek için bir kütle analiz cihazı kullanır. Nükleer manyetik rezonans dedektörleri, güçlü bir mıknatısın kutupları arasına yerleştirilen çekirdekleri ışınlar. Radyasyon emilir, paralel çekirdekler daha yüksek bir enerji durumuna girer ve her bir atom, bulunduğu yere ve kimyasal bileşimine özgü bir spektrum üretir. Bazı HPLC’ler, akış hücresinden geçen sütun atık sularının kırılma endeksindeki değişikliği ölçer. Diğerleri, bileşikler daha kısa dalga boyu enerjisi tarafından uyarıldığında ve daha yüksek dalga boyu radyasyonu yaydığında meydana gelen floresanı tespit eder.

Özellikleri

HPLC’ler, genel özellikler, ekran seçenekleri ve arayüz seçenekleri bakımından farklılık gösterir.

Genel özellikler şunları içerir:

  • self-calibration
  • self-test diagnostics
  • data storage
  • programmability.




Yerleşik kromatograflı ve uygulama yazılımlı cihazlar yaygın olarak bulunur. Bazı HPLC’ler aşırı sıcaklıklar için uygundur. Diğerleri analog voltaj, analog akım, frekans veya pulse verir.

Örnekler şunları içerir:

  • amplitude modulation (AM)
  • frequency modulation (FM)
  • pulse width modulation (PWN)
  • sine waves,
  • pulse trains


Analog cihazlar genellikle bir analog metre ile anahtar ve topuzlu bir ön panel içerir. Dijital cihazlar genellikle seri veya paralel bir bilgisayar arayüzü ve video görüntüsü sağlar. Seri protokoller, Universal Serial Bus (UBS), RS232, RS422 ve RS485’i içerir.



HPLC Detektörleri

Yüksek performanslı sıvı kromatografı (HPLC) detektörleri, sıvı düşük hacimli bir akış hücresinden geçerken bir ışık demeti geçirir. Işık yoğunluğundaki değişiklikler kaydedilir ve bir kromatografi üretilir. HPLC dedektörleri birkaç algılama yöntemi kullanır.

kromatorgram hplc
Örnek Kromatogram

Ultraviyole (UV) dedektörleri bir numunenin bir veya daha fazla dalga boyunda ışığı emme yeteneğini ölçer. Işık saçılma detektörleri, atık suları nebülize eder, çözücüyü buharlaştırır ve sonra bir ışık saçma hücresindeki damlacıkları algılar. Elektrokimyasal dedektörler akımı bir analitin uygun bir elektrottaki oksidasyon / redüksiyon reaksiyonundan ölçer. Radyokimyasal dedektörler, beta partikül iyonlaşmasıyla ilişkili floresanı tespit etmek için trityum veya karbon-14 kullanır. Kütle spektroskopisi dedektörleri bir örneği iyonize eder ve iyon akımını tespit etmek için bir kütle analiz cihazı kullanır. Nükleer manyetik rezonans dedektörleri, güçlü bir mıknatısın kutupları arasına yerleştirilen çekirdekleri ışınlar. Radyasyon emilir, paralel çekirdekler daha yüksek bir enerji durumuna girer ve her bir atom, bulunduğu yere ve kimyasal bileşimine özgü bir spektrum üretir. Bazı HPLC dedektörleri, akış hücresinden geçen atık sularının kırılma indisindeki değişimleri ölçer. Diğerleri, daha kısa dalga boyu enerjisi tarafından uyarıldığında ve daha yüksek dalga boyu radyasyonu yaydığında meydana gelen floresanı tespit eder.

kolon hplc

HPLC detektörleri için önemli spesifikasyonlar dinamik aralık, detektör dalga boyu, tepki süresi, akış hücresi hacmi ve akış hücresi hızıdır. Dinamik aralık, çok noktalı bir kalibrasyon eğrisi kullanarak bilinmeyen numunelerin ölçülmesine izin verir. Zirve alanının çözünen miktar ile doğrudan orantılı olduğunu gösterir, böylece, çözünen miktarın iki katına çıkılması, pik alanın iki katına çıkmasına neden olur. Detektör dalga boyu emisyon dalga boyunu gösterir. Tepki süresi, bir çözünüğün bir HPLC detektörüne girişi ile bir kromatogram oluşturulması arasındaki süredir. Akış hücresi hacmi ve akış hücresi hızı sırasıyla kapasite ve verimin ölçülmesidir. Maksimum basınç derecesi, HPLC dedektörlerini ararken göz önünde bulundurulması gereken başka bir önemli özelliktir.



Ayrıca bakınız; HPLC Kolon Seçimi

Daha fazla detay.

İlk yorum yapan olun

Bir yanıt bırakın

E-posta hesabınız yayımlanmayacak.